血蓝蛋白介绍及提取方法
分子量450 000~1300 000。节肢动物的血蓝蛋白一条多肽链与一分子氧结合,含铜量0.17%;软体动物的血蓝蛋白一条多肽链则与6分子氧结合,含铜量0.025%。铜以二价形式与蛋白直接结合。血蓝蛋白有多种催化作用,特别是变性后,在特定条件下具有多酚氧化酶、过氧化氢酶和脂氧化酶等活性。
无脊椎动物中,多数动物的血液不含血红蛋白,如软体动物(以及节肢动物所含的是血蓝蛋白(亦称为血蓝素)。
血蓝蛋白是节肢动物和软体动物血淋巴中的含铜呼吸蛋白,脱氧状态为无色,结合氧状态为蓝色。分子质量一般为50 ku~75 ku,由7个或8个功能单位组成圆柱形结构。组成血蓝蛋白的亚单位数目较多,每个亚单位都含有2个Cu(Ⅰ)离子。不同蛋白质所含亚单位数目不同,有些血蓝蛋白的分子质量可达9×103 ku。软体血蓝蛋白是圆柱状分子,含有10个~20个亚单位,每个亚单位(分子质量为350 ku~450 ku)有7个~8个功能单元(氧分子结合部位)。节肢动物血蓝蛋白由六聚体或多个六聚体组成,分子质量约为3.5×103 ku,每个亚单位(分子质量为7.5 ku)含有一个氧合中心。血蓝蛋白的主要生物学功能与机体内的输氧有关,它与血红蛋白和蚯蚓血红蛋白并称为动物界中的3种呼吸蛋白。但近年的研究表明,血蓝蛋白是一种多功能蛋白,它不仅具有输氧功能,而且还与能量的贮存、渗透压的维持及蜕皮过程的调节有关。特别引起学术界重视的是,血蓝蛋白还具有酚氧化物酶活性和抗菌功能,被认为是节肢动物和软体动物中的一种重要的免疫分子。
从河蚌中提取,纯化,以及冷冻干燥血蓝蛋白的工艺。
(1)河蚌样本在45℃(±5℃)温水中预处理,剥离甲壳;
(2)注射器中加入抗凝剂,抽取心脏血;
(3)血液透析后低温离心,取上清,得到血蓝蛋白粗提液
(4)依次用凝胶过滤色谱、阴离子交换色谱层析得到高纯度血蓝蛋白原液
(5)将血蓝蛋白原液加入保护剂进行冻干,制成冻干品。