卵清蛋白如何提取
卵清蛋白是一种优质蛋白质,占蛋清蛋白总量的 54%-69%,卵清蛋白是典型的球蛋白,分子量为 44.5k Da,属含磷糖蛋白,有四个自由巯基、385 个氨基酸残基。这些氨基酸残基相互缠绕折叠形成具有高度二级结构的球型结构,大部分为α-螺旋和β-折叠。卵清蛋白中心有 1 个二硫键和 4 个巯基,当加热时暴露出来,通过分子间相互作用使卵清蛋白胶体结构变得更稳定。
操作步骤:
1,取新鲜鸡蛋两只,得蛋清50ml,置于烧杯中放置在25℃-30℃的水中,不断搅拌条件下,缓慢加入等体积得三氯乙酸-丙酮(1:2V/V),立即出现大量白色絮状沉淀,加完后最终PH约3.5,继续搅拌30min,然后在4℃冰箱中放置过夜。
2,次日用漏斗抽滤,得黄绿色清液。
3,边搅拌边加入4℃预冷的丙酮200ml沉淀蛋白,在4℃放置2h之后将上清液小心倒入瓶中回收,下部沉淀部分于4000rpm离心5min,收集沉淀。
4,将沉淀溶于10ml无离子水中,对无离子水(50倍)透析4h,换水两次,再对碳酸钠缓冲液透析过夜,4000rpm离心10min ,去除不溶物。