免疫荧光的简单介绍
2023-09-27
在荧光显微镜中，有两种方法可以显示您感兴趣的蛋白质。要么借助内在荧光信号——通过将荧光蛋白与靶蛋白进行基因连接——要么借助与目标蛋白特异性结合的荧光标记抗体。对于一些生物学问题，执行后一个问题更有用甚至是必要的。例如，在组织学样本的情况下，不可能使用荧光蛋白，因为通常样本来自不含有任何荧光蛋白的生物体。此外，如果有功能性抗体可用，免疫荧光比荧光蛋白技术快得多，在荧光蛋白技术中，您必须克隆感兴趣的基因并将 DNA 转染到足够的细胞中。荧光蛋白的另一个缺点在于它们本身就是蛋白质的性质。有了它，它们在细胞内具有特定的蛋白质特征，这可能导致功能障碍或对所附着的感兴趣蛋白质的误解。然而，应该考虑使用荧光蛋白通常是研究活细胞的首选方法。
免疫荧光利用抗体对其抗原的非常特异性的结合亲和力。这可以有两种不同的外观。最简单的方法是使用一种与感兴趣的蛋白质结合的荧光标记抗体。这称为直接免疫荧光。
在大多数情况下，使用两种形式的抗体。第一个与目标蛋白结合，本身没有荧光标记（一抗）。但是与一抗结合的第二种抗体（二抗）特异性地携带荧光染料。这种方法称为间接免疫荧光，具有几个优点。一方面存在放大效应，因为不止一种二抗与一种一抗结合。另一方面，通常比用普通荧光染料标记的特异性一抗更容易找到二抗。
免疫荧光利用抗体对其抗原的非常特异性的结合亲和力。这可以有两种不同的外观。最简单的方法是使用一种与感兴趣的蛋白质结合的荧光标记抗体。这称为直接免疫荧光。
在大多数情况下，使用两种形式的抗体。第一个与目标蛋白结合，本身没有荧光标记（一抗）。但是与一抗结合的第二种抗体（二抗）特异性地携带荧光染料。这种方法称为间接免疫荧光，具有几个优点。一方面存在放大效应，因为不止一种二抗与一种一抗结合。另一方面，通常比用普通荧光染料标记的特异性一抗更容易找到二抗。
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