枯草芽孢杆菌的实验
2023-07-21
实验材料:
枯草芽孢杆菌, 种子培养基,发酵培养基,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶,发酵罐。
实验方法:
工艺流程:
试管斜面菌种(12 h,37℃)→接种(1环菌苔)→摇瓶种子培养液中,250 mL三角瓶振荡培养(12 h,37℃)→种子培养液,接种(1%-5%)→机械搅拌发酵罐发酵。
发酵罐种子液的制备:
摇瓶种子培养基:葡萄糖 20 g,牛肉膏1 g,蛋白胨5 g, NaCl 5 g,H2 O 1 000 ml,pH自然 ,高压灭菌锅121℃灭菌20 min。
摇瓶种子培养基分装于250ml三角瓶,每瓶50ml。从斜面上挑取一环菌种,接入摇瓶种子培养基,37℃,150rpm振荡培养12小时即为种子液。
发酵培养基制备:
发酵培养基:蔗糖20 g,淀粉20 g,酵母膏1 g,蛋白胨5 g, NaNO3 3 g,KH2PO4 5 g, CaCO3 10 g,H2O 1 000 ml;pH7.0。
淀粉糊化:淀粉:水=1:4加入预热至60℃水中,边加边搅拌,煮沸10分钟成糊状(煮沸过程中不断搅拌)。
发酵:
①空消:空罐灭菌。
②实消:将发酵培养基5L从进样口倒入15 L发酵罐中,盖上盖子。检查发酵罐安装完好后, 105℃灭菌15分钟。
③接种:可以采用火焰接种法,在接种口放置酒精圈,点燃后,将菌种通过火焰圈迅速倒入发酵罐内,进行计时培养。
④发酵:种子培养好后,将种子接到发酵罐中,接种量1-5%,36°C—37°C 控温通风培养,搅拌转速200转/分,0~1 h,通风比l:0.5~0.8;35 hr以后调速380转/分;24~28小时,通风1:1.0。每6小时测定活力一次,外观糖一次;每2小时测pH一次,记录通风量,转速、温度等。发酵过程监测时,注意观察发酵罐的结构,测定结果记录于表,测定时同时镜检。定期测定菌浓,当菌浓达到最高时结束发酵。
⑤取样:自培养操作开始起,每6h取1次样。取样前后,要用蒸汽冲取样口。
枯草芽孢杆菌, 种子培养基,发酵培养基,恒温摇床,无菌吸管,试管,三角瓶,发酵罐。
实验方法:
工艺流程:
试管斜面菌种(12 h,37℃)→接种(1环菌苔)→摇瓶种子培养液中,250 mL三角瓶振荡培养(12 h,37℃)→种子培养液,接种(1%-5%)→机械搅拌发酵罐发酵。
发酵罐种子液的制备:
摇瓶种子培养基:葡萄糖 20 g,牛肉膏1 g,蛋白胨5 g, NaCl 5 g,H2 O 1 000 ml,pH自然 ,高压灭菌锅121℃灭菌20 min。
摇瓶种子培养基分装于250ml三角瓶,每瓶50ml。从斜面上挑取一环菌种,接入摇瓶种子培养基,37℃,150rpm振荡培养12小时即为种子液。
发酵培养基制备:
发酵培养基:蔗糖20 g,淀粉20 g,酵母膏1 g,蛋白胨5 g, NaNO3 3 g,KH2PO4 5 g, CaCO3 10 g,H2O 1 000 ml;pH7.0。
淀粉糊化:淀粉:水=1:4加入预热至60℃水中,边加边搅拌,煮沸10分钟成糊状(煮沸过程中不断搅拌)。
发酵:
①空消:空罐灭菌。
②实消:将发酵培养基5L从进样口倒入15 L发酵罐中,盖上盖子。检查发酵罐安装完好后, 105℃灭菌15分钟。
③接种:可以采用火焰接种法,在接种口放置酒精圈,点燃后,将菌种通过火焰圈迅速倒入发酵罐内,进行计时培养。
④发酵:种子培养好后,将种子接到发酵罐中,接种量1-5%,36°C—37°C 控温通风培养,搅拌转速200转/分,0~1 h,通风比l:0.5~0.8;35 hr以后调速380转/分;24~28小时,通风1:1.0。每6小时测定活力一次,外观糖一次;每2小时测pH一次,记录通风量,转速、温度等。发酵过程监测时,注意观察发酵罐的结构,测定结果记录于表,测定时同时镜检。定期测定菌浓,当菌浓达到最高时结束发酵。
⑤取样:自培养操作开始起,每6h取1次样。取样前后,要用蒸汽冲取样口。