蛋白质印迹实验方法
2023-04-13
蛋白质印迹是将样品转移到固相载体上后，利用相对应的探测反应来检测样品的一种实验方法。蛋白质标记法首先将电泳后分离的蛋白质从凝胶转移到硝酸纤维素膜上。
通常有两种方法：插入标记法和电泳法。在湿滤纸上，将硝酸纤维素膜放在凝胶上，然后在滤纸上放一层吸水材料，然后用重物压，缓冲液将通过毛细管作用流过凝胶。
当缓冲液通过凝胶时，蛋白质被带到了硝酸纤维素膜表面，硝酸纤维素膜可以通过疏水的相互作用与蛋白质进行不可逆的结合。这个持续的过程会继续升温，此时凝胶中的蛋白质基本可以转移到硝酸纤维素膜上。
该方法虽然具有较高的转移效率，但通常只能转移凝胶中约（10％-20％）的一小部分蛋白质。电泳分离可以更快速和更有效地的实现转移。该实验方法采用多孔塑料板和有机玻璃板，将凝胶以及硝酸纤维素膜夹在中间，形成了“三明治”状态，再将其浸入两个平行电极之间的缓冲液中进行电泳。选择合适的电泳方向以使蛋白质离开凝胶并结合到硝酸纤维素膜上。转移的硝酸纤维素膜称为斑点（印迹），可用于进一步的进行蛋白质的检测。
通常有两种方法：插入标记法和电泳法。在湿滤纸上，将硝酸纤维素膜放在凝胶上，然后在滤纸上放一层吸水材料，然后用重物压，缓冲液将通过毛细管作用流过凝胶。
当缓冲液通过凝胶时，蛋白质被带到了硝酸纤维素膜表面，硝酸纤维素膜可以通过疏水的相互作用与蛋白质进行不可逆的结合。这个持续的过程会继续升温，此时凝胶中的蛋白质基本可以转移到硝酸纤维素膜上。
该方法虽然具有较高的转移效率，但通常只能转移凝胶中约（10％-20％）的一小部分蛋白质。电泳分离可以更快速和更有效地的实现转移。该实验方法采用多孔塑料板和有机玻璃板，将凝胶以及硝酸纤维素膜夹在中间，形成了“三明治”状态，再将其浸入两个平行电极之间的缓冲液中进行电泳。选择合适的电泳方向以使蛋白质离开凝胶并结合到硝酸纤维素膜上。转移的硝酸纤维素膜称为斑点（印迹），可用于进一步的进行蛋白质的检测。
沪公网安备31012002005909号
