分离正常外周血白细胞的实验步骤
2023-04-10
加速红细胞沉降实验法:
①抽取抗凝静脉血，并加入等量的3％明胶盐水或6％葡聚糖溶液，并充分混合。
②将试管在室温或37℃的培养箱中直立放置30-60分钟，并利用明胶与红细胞的结合作用促进红细胞快速下沉，而白细胞则保留在明胶溶液中。
③用毛细管吸管吸取富含白细胞的上清液，然后将其转移到另一个试管中。
④将钙和镁离子+汉克斯平衡盐溶液添加到距试管口3cm的位置，混合均匀，在水平离心机中以2000r / min的速度离心10min，弃去上清液，并用相同的方法洗涤两次。
⑤将沉淀的细胞重悬于含10％-20％灭活的小牛血清的汉克斯平衡盐溶液中，计数，并制备成所需细胞浓度的悬浮液，通常为2×106 / min。
自然沉降实验方法:
①取2ml静脉血，将其放入带有抗凝剂的试管中，并轻轻混合。
②将试管在室温或37℃的培养箱中直立放置30-60分钟，然后等待红细胞自然沉降。此时，可以看到试管中的悬浮液分为三层，上层是浅黄色血浆，下层是红血球，并且有灰白色白细胞层（正常外周血白细胞）上的红细胞层。
③用毛细管吸起红细胞层上富含白细胞的细胞悬液，并将其转移至另一试管中；
④将钙和镁离子+汉克斯平衡盐溶液添加到距试管口3cm的位置，混合均匀，在水平离心机中以2000r / min的速度离心10分钟，弃去上清液，并用相同的方法洗涤两次。
⑤将沉淀的细胞重悬于含10％-20％灭活的小牛血清的汉克斯平衡盐溶液中，计数，并制备成所需细胞浓度的悬浮液，通常为2×106 / min。
①抽取抗凝静脉血，并加入等量的3％明胶盐水或6％葡聚糖溶液，并充分混合。
②将试管在室温或37℃的培养箱中直立放置30-60分钟，并利用明胶与红细胞的结合作用促进红细胞快速下沉，而白细胞则保留在明胶溶液中。
③用毛细管吸管吸取富含白细胞的上清液，然后将其转移到另一个试管中。
④将钙和镁离子+汉克斯平衡盐溶液添加到距试管口3cm的位置，混合均匀，在水平离心机中以2000r / min的速度离心10min，弃去上清液，并用相同的方法洗涤两次。
⑤将沉淀的细胞重悬于含10％-20％灭活的小牛血清的汉克斯平衡盐溶液中，计数，并制备成所需细胞浓度的悬浮液，通常为2×106 / min。
自然沉降实验方法:
①取2ml静脉血，将其放入带有抗凝剂的试管中，并轻轻混合。
②将试管在室温或37℃的培养箱中直立放置30-60分钟，然后等待红细胞自然沉降。此时，可以看到试管中的悬浮液分为三层，上层是浅黄色血浆，下层是红血球，并且有灰白色白细胞层（正常外周血白细胞）上的红细胞层。
③用毛细管吸起红细胞层上富含白细胞的细胞悬液，并将其转移至另一试管中；
④将钙和镁离子+汉克斯平衡盐溶液添加到距试管口3cm的位置，混合均匀，在水平离心机中以2000r / min的速度离心10分钟，弃去上清液，并用相同的方法洗涤两次。
⑤将沉淀的细胞重悬于含10％-20％灭活的小牛血清的汉克斯平衡盐溶液中，计数，并制备成所需细胞浓度的悬浮液，通常为2×106 / min。
沪公网安备31012002005909号
