大肠杆菌感受态制备操作步骤
2023-03-29
1.挑选一个大肠杆菌菌落，并将其接种在20mL LB培养基中，并在37°C振荡培养过夜。
2.以1％的接种量接种20mL LB培养基，并在37°C下以230 rpm的转速摇动230小时3小时。
3.取1ml培养物，冰浴30分钟，在4℃以4,000 r / min离心3分钟，然后除去上清液。
4.加入500 ul冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4℃以4,000 r / min的速度离心3分钟，然后除去上清液。
5.添加100ul体积的冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，重悬细菌沉淀，在4°C下以4,000 r / min离心4分钟，然后除去上清液。
6.50 ul体积的冰冷的0.1 mol / L CaCl 2溶液，将细菌沉淀重悬在冰浴中3 h-24 h，即大肠杆菌感受态细胞。
沪公网安备31012002005909号
