琼脂糖凝胶电泳实验流程介绍
2023-03-27
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准备：
5xTBE缓冲液：450 mmol / L三硼酸，10 mmol / L EDTA，pH 8.0。使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。
制胶：
①根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。
②用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。
③让溶液冷却至约50°C-60°C。如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ ml）或以1μL/ 30 mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。
④将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。凝胶的厚度通常在3至5mm之间。上胶模具如下图所示。对于小胶水，倒入约25-30 mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70 mL。如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。
⑤让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。
上样：
①将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。
②可根据样品浓度调节样品量。如果DNA含量低，则可以按照上述比例增加样品量，但总体积不得超过样品罐的容量（小孔通常为40μl，大孔通常为200μl上限取决于粘合膜的规格。
③添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。
电泳：
①添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。控制电压保持在110 V，电流大于40 mA。
②当条带移离凝胶前端约2 cm（约40分钟）时，停止电泳。
③拍照并在紫外线下观察。
5xTBE缓冲液：450 mmol / L三硼酸，10 mmol / L EDTA，pH 8.0。使用时，将上述存储溶液稀释至0.5倍TBE缓冲溶液10倍，可同时用作电泳和凝胶制备的缓冲溶液。
制胶：
①根据凝胶量和凝胶浓度，向琼脂糖瓶中加入一定量的电泳缓冲液（琼脂糖粉的总液体量不得超过锥形瓶容量的50％）。
②用保鲜膜或牛皮纸盖住锥形瓶的嘴，在膜或纸上打一些小孔，然后在微波中加热并溶解琼脂糖。加热时，当溶液沸腾时，戴上耐热手套并小心地摇动锥形瓶，以充分均匀地溶解琼脂糖。重复该操作几次，直到琼脂糖完全溶解。
③让溶液冷却至约50°C-60°C。如有必要，添加溴化乙锭溶液（终浓度为0.5μg/ ml）或以1μL/ 30 mL的比例添加DNAgreen染料，并充分混合。
④将琼脂糖溶液倒入橡胶模具中，然后将梳子插入适当的位置。凝胶的厚度通常在3至5mm之间。上胶模具如下图所示。对于小胶水，倒入约25-30 mL的琼脂糖溶液，对于大胶水，倒入约60-70 mL。如果需要切割和回收凝胶，可以适当地增稠凝胶。
⑤让胶水在室温下凝固约30分钟至1小时。
上样：
①将适量的样品与6x上样缓冲液混合（例如：1μl样品和5μl6x上样缓冲液），然后用微量移液器小心地将其添加到样品孔中。
②可根据样品浓度调节样品量。如果DNA含量低，则可以按照上述比例增加样品量，但总体积不得超过样品罐的容量（小孔通常为40μl，大孔通常为200μl上限取决于粘合膜的规格。
③添加每个样品后，请更换移液器吸头，以防止相互污染。装入样品时要小心，以免损坏凝胶或刺穿样品罐底部的凝胶。
电泳：
①添加样品后，关闭电泳槽盖并立即打开电源。控制电压保持在110 V，电流大于40 mA。
②当条带移离凝胶前端约2 cm（约40分钟）时，停止电泳。
③拍照并在紫外线下观察。
沪公网安备31012002005909号
