简单介绍质粒DNA提取实验操作步骤
2023-03-24
1.细菌繁殖：LB培养基，2ml / 20ml，37℃，200rpm，摇动过夜；
2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；
3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；
4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在室温下静置5分钟；
5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分钟；
6.加入0.9 ml预冷的乙酸钾，混合均匀，在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
7.加入1.5 ml异丙醇，并将其放在-20°C的冰箱中放置15分钟；
8.在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
9.取沉淀并将其悬浮在400 ul TE缓冲液中；
10.添加40ul 3M NaAc；
11.苯酚/氯仿，萃取，乙醇沉淀；
12.在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
13.取出沉淀物，将其冷冻干燥，然后重悬于50ul TE缓冲液中；
14.电泳检测提取的DNA的质量。
2.离心10分钟，转速为5000 rpm，4°C；丢弃液体；
3.用预冷的TES缓冲液洗涤沉淀物（细胞），在4°C下以10 rpm，5 000 rpm离心10分钟，加入预冷的1 ml溶液I，并冰浴10分钟；
4.重悬，加入150ul溶菌酶母液，在室温下静置5分钟；
5.添加1.2ml的溶液II并在冰浴上保持5分钟；
6.加入0.9 ml预冷的乙酸钾，混合均匀，在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
7.加入1.5 ml异丙醇，并将其放在-20°C的冰箱中放置15分钟；
8.在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
9.取沉淀并将其悬浮在400 ul TE缓冲液中；
10.添加40ul 3M NaAc；
11.苯酚/氯仿，萃取，乙醇沉淀；
12.在4°C下以12 000 rpm离心10分钟；
13.取出沉淀物，将其冷冻干燥，然后重悬于50ul TE缓冲液中；
14.电泳检测提取的DNA的质量。
沪公网安备31012002005909号
