使用透析袋法琼脂糖凝胶回收DNA介绍
2023-03-16
使用透析袋提取琼脂糖凝胶是一种电洗脱过程。它涉及通过施加电流洗脱 DNA。原理是电场导致 DNA 条带迁移出凝胶。 DNA 片段将被捕获到透析膜中。首先,您需要将凝胶片在 -20°C 下冷冻 30 分钟,以便于处理。
实验的步骤:
将5cm的透析袋剪开,开水活化10分钟。激活后,用蒸馏水内外冲洗,然后用 0.5 × TBE 缓冲液冲洗。用透析夹密封透析袋的一端,并将冷冻凝胶插入管内。
加入 200-400 µl,0.5 × TBE 缓冲液,并用第二个透析管密封管的另一端。之后,将透析袋浸入装有电泳缓冲液的电泳槽中。DNA 条带应与电极平行并施加 5 V/cm 或 100 V 的电场。
可以使用紫外灯跟踪 DNA 迁移。 DNA 从凝胶中迁移出来需要 10-15 分钟。迁移的 DNA 将向正端粘附在透析膜上。它会留在里面,但不会移出透析袋。
轻轻反转电流方向,将 DNA 从透析膜上敲下来。之后,从管中收集缓冲液并使用苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀提取 DNA。将沉淀的 DNA 溶解在适当体积 (10 µl) 的 TE 缓冲液或水中。
DNA 沉淀量很小,可能看不到。最终纯化的样品可以很容易地用于下游应用。虽然这似乎是一个简单的过程,但使用透析袋提取琼脂糖凝胶并不是那么容易的协议。该方案比较耗时,且仍然涉及苯酚/氯仿萃取,然后是乙醇沉淀。
实验的步骤:
将5cm的透析袋剪开,开水活化10分钟。激活后,用蒸馏水内外冲洗,然后用 0.5 × TBE 缓冲液冲洗。用透析夹密封透析袋的一端,并将冷冻凝胶插入管内。
加入 200-400 µl,0.5 × TBE 缓冲液,并用第二个透析管密封管的另一端。之后,将透析袋浸入装有电泳缓冲液的电泳槽中。DNA 条带应与电极平行并施加 5 V/cm 或 100 V 的电场。
可以使用紫外灯跟踪 DNA 迁移。 DNA 从凝胶中迁移出来需要 10-15 分钟。迁移的 DNA 将向正端粘附在透析膜上。它会留在里面,但不会移出透析袋。
轻轻反转电流方向,将 DNA 从透析膜上敲下来。之后,从管中收集缓冲液并使用苯酚/氯仿提取和乙醇沉淀提取 DNA。将沉淀的 DNA 溶解在适当体积 (10 µl) 的 TE 缓冲液或水中。
DNA 沉淀量很小,可能看不到。最终纯化的样品可以很容易地用于下游应用。虽然这似乎是一个简单的过程,但使用透析袋提取琼脂糖凝胶并不是那么容易的协议。该方案比较耗时,且仍然涉及苯酚/氯仿萃取,然后是乙醇沉淀。