内毒素如何检测
内毒素检测要用到一种鲎yabo官网手机版 。鲎是一种海洋节肢动物,形似蟹,身体呈青褐色,包被硬质甲壳。鲎的血液是淡蓝色的,一遇到细菌就会凝固。人们利用这一特点开发出鲎yabo官网手机版 ,即将鲎血液中的变形细胞进行溶解,将溶解物制成的无菌冷冻干燥品。这里面含有能被微量内毒素激活的凝固酶原,从而产生浑浊效应。
常见内毒素方法有凝胶法、浊度法和显色法。浊度法是根据浊度变化而测定内毒素含量,显色法是利用凝固酶的特定底物显色来测定内毒素含量,这两种方法可以定量。凝胶法是根据鲎yabo官网手机版 与内毒素产生的凝集反应来定性或半定量内毒素的方法。凝固酶能使凝固蛋白原产生凝胶,可肉眼观察,不用特殊的仪器设备。
检测时,要注意鲎yabo官网手机版 的灵敏度,不同鲎yabo官网手机版 的灵敏度不同。一般要采用标准品进行鲎yabo官网手机版 灵敏度的复核。确定供试品最大有效稀释倍数。同时实验器具也都要保证已去除热原。
内毒素和外毒素区别
1、存在部位
外毒素由活的细菌释放至细菌体外;内毒素为细菌细胞壁结构成份,菌体崩解后释出。
2、细菌种类
外毒素以革兰氏阳性菌多见;内毒素以革兰氏阴性菌多见。
3、化学组成
外毒素主要成分为蛋白质(分子量27,000~900,000);内毒素主要成分为磷脂一多糖一蛋白质复合物(毒性主要为类脂A)。
4、稳定性
外毒素不稳定,60℃以上能迅速破坏;内毒素耐热,60℃耐受数小时。
5、毒性作用
外毒素毒性强,微量对实验动物有致死作用(以ug计量)。各种外毒素有选择作用,引起特殊病变,不引起宿主发热反应。抑制蛋白质合成,有细胞毒性、神经毒性、紊乱水盐代谢等;内毒素毒性稍弱,对实验动物致死作用的量比外毒素为大。各种细菌内素的毒性作用大致相同。引起发热、弥漫性血管内凝血、粒细胞减少血症、施瓦兹曼现象等。
6、抗原性
外毒素抗原性强,可刺激机体产生高效价的抗毒素。经甲醛处理,可脱毒成为类毒霉,仍有较强的抗原性,可用于人工自动免疫;内毒素刺激机体对多糖成份产生抗体,不形成抗毒素,不能经甲醛处理成为类毒素。