RNA抽取实验及注意事项
2019-01-15
RNA抽取主要使用TRIzoI抽提法，TRIzoI主要用于裂解细胞，使细胞中的蛋白核酸物质得到释放。改进yabo官网手机版
盒抽屉方法，在样品加入裂解液后，通过高速离心总RNA在高离序盐状态下选着吸附于离心柱内硅基质膜上，通过一系列快速漂洗离心。去蛋白液和漂洗液将细胞代谢物、蛋白等杂质去除，最后低盐的RNase-freeH20将纯净RNA从硅基质膜上洗脱。
注意事项：
RNA不稳定、容易被降解或污染，因此在进行RNA实验时，要保持环境的清洁。RNA样品制备好应储存在-80℃，尽量避免反复冻融。使用RNA样品时、应在冰上操作。
预防RNase污染、注意以下几点
1.经常更换新手套，皮肤经常带有细菌、可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RL中时不时会被RNase降解。提取后继续处理过程中应该使用不含RNase的塑料盒玻璃器具。玻璃器具可在150℃烘烤4小时，塑料器具可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，清水彻底洗净、灭菌可除去RNase。
4.配置溶液应使用RNase-Free ddH20（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至浓度0.1%（V/V）混匀放置过夜、高压灭菌。）
注意事项：
RNA不稳定、容易被降解或污染，因此在进行RNA实验时，要保持环境的清洁。RNA样品制备好应储存在-80℃，尽量避免反复冻融。使用RNA样品时、应在冰上操作。
预防RNase污染、注意以下几点
1.经常更换新手套，皮肤经常带有细菌、可能导致RNase污染。
2.使用无RNase的塑料制品避免交叉污染。
3.RNA在裂解液RL中时不时会被RNase降解。提取后继续处理过程中应该使用不含RNase的塑料盒玻璃器具。玻璃器具可在150℃烘烤4小时，塑料器具可在0.5M NaOH中浸泡10分钟，清水彻底洗净、灭菌可除去RNase。
4.配置溶液应使用RNase-Free ddH20（将水加入到干净的玻璃瓶中，加入DEPC至浓度0.1%（V/V）混匀放置过夜、高压灭菌。）
